ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ DNA

 

ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ  ΝΟΥΚΛΕЇΚΩΝ  ΟΞΕΩΝ

ΕΚΦΕ ΠΡΕΒΕΖΑΣ 

απομόνωση DNA 

ΟΡΓΑΝΑ	ΥΛΙΚΑ
ΜΠΛΕΝΤΕΡ ΚΟΥΖΙΝΑΣ	ΜΠΑΝΑΝΑ
ΜΑΧΑΙΡΙ	ΠΑΓΟΣ ΤΡΙΜΜΕΝΟΣ
2 ΠΟΤΗΡΙΑ ΖΕΣΕΩΣ 250 ml	ΥΓΡΟ ΠΙΑΤΩΝ 30 ml
ΠΙΠΕΤΑ ΤΩΝ 10 ml	ΑΛΑΤΙ  9g
4 ΔΟΚΙΜΑΣΤΙΚΟΙ ΣΩΛΗΝΕΣ	ΑΠΙΟΝΙΣΜΕΝΟ ΝΕΡΟ 300 ml
ΧΩΝΙ	ΑΙΘΑΝΟΛΗ ΠΑΓΩΜΕΝΗ (-20oC)
ΦΙΛΤΡΟ ΤΟΥ ΚΑΦΕ	ΠΕΨΙΝΗ
ΓΥΑΛΙΝΗ ΡΑΒΔΟΣ ΑΝΑΔΕΥΣΗΣ	Ή ΧΥΜΟ ΑΝΑΝΑ
ΣΤΗΡΙΓΜΑ ΔΟΚΙΜΑΣΤΙΚΩΝ ΣΩΛΗΝΩΝ	Ή ΚΑΘΑΡΙΣΤΙΚΟ ΦΑΚΩΝ ΕΠΑΦΗΣ

ΠΩΣ ΘΑ ΠΡΑΓΜΑΤΟΠΟΙΗΘΕΙ ΤΟ ΠΕΙΡΑΜΑ

 Σ’ ένα μπλέντερ βάλτε μια μικρή ξεφλουδισμένη μπανάνα, λίγο αλάτι, 300ml απιονισμένο νερό. Το μπλέντερ διαχωρίζει τα κύτταρα της μπανάνας οπότε τώρα έχετε μια σούπα κυττάρων μπανάνας.

  

2. Αδειάστε τη σούπα μπανάνας σ’ ένα δοχείο αφού το διηθήσετε με φίλτρο καφέ. Προσθέστε στο διήθημα 2 κουταλιές της σούπας απορρυπαντικό αραιωμένο (περίπου 30ml). Αναμείξτε το και αφήστε το μείγμα να κατακαθίσει για 5-10min.  Αδειάστε το μείγμα σε δοκιμαστικούς σωλήνες, περίπου 2-3ml σε κάθε σωλήνα (1/3 του σωλήνα).

 

3. Προσθέστε 1-2 σταγόνες του ένζυμου πεψίνη ή 0,5-1cm³ υγρό καθαρισμού φακών σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα. Αν δεν έχετε αυτό το υλικό ρίξτε χυμό ανανά ή υγρό καθαρισμού των φακών επαφής.

 

 

4. Γείρετε το δοκιμα-στικό σωλήνα και ρίξτε αργά-αργά σ’ αυτόν υδατικό διά-λυμα παγωμένης αιθυ-λικής ή ισοπροπυλι-κής αλκοόλης 70^ο– 95^ο, ώστε να δημιου-ργήσει ένα στρώμα, πάνω από το μείγμα μπανάνας.

Να προσθέσετε τόση αλκοόλη όσο και το μείγμα. Αφήστε το να ηρεμίσει. Το DNA θα συγκεντρωθεί στη φάση της αλκοόλης.

5. για να συλλέξετε το DNA, μπορείτε να χρησιμοποιήσετε ένα ξύλινο καλαμάκι από σουβλάκια ή οδοντογλυφίδα, περιστρέφοντάς το αργά ή μια γυάλινη ράβδο.

 

 

 

 

 

Το οινόπνευμα είναι ελαφρύτερο από το νερό έτσι επιπλέει και σχηματίζονται 2 φάσεις: Το μείγμα και η αιθανόλη. Η πρωτεΐνη και τα λίπη πάνε στο κατώτερο σημείο ενώ το DNA στη φάση του οινοπνεύματος. Αν έχουν σχηματιστεί φυσαλίδες οι οποίες είναι κολλημένες στο DNA αυτές θα το τραβήξουν προς την επιφάνεια της αιθανόλης όπου θα σχηματιστεί ένα διαφανές συσσωμάτωμα σαν βλέννα και θα κρέμονται μερικές ίνες.